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生物信息学与 AI 制药工程
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《质控指标设计:基因数与UMI阈值设置实践指南》
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质控指标设计:基因数与UMI阈值设置实践指南
共计 30 章节
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01
课程介绍与目标
为什么基因数与UMI阈值如此重要 · 学习路径概览
课程介绍
目标
02
单细胞测序基本原理
10x Genomics · Drop-seq等主流平台的工作流程
单细胞测序基本原…
Genomics
03
UMI技术原理
什么是Unique Molecula… · 如何纠正PCR扩增偏差
UMI
技术原理
04
基因数与UMI的关系
解读Cell Ranger生成的矩阵…
UMI
基因数
05
数据预处理总览
从FASTQ到表达矩阵的完整pipe…
数据预处理总览
FASTQ
06
Cell Ranger基本流程
count · aggr · reanalyze常用命令及其输出文…
Cell
Ranger
07
质量控制指标概述
基因数 · UMI数 · 线粒体比例
质量控制指标概述
基因数
08
基因数阈值的作用
过滤空滴(empty droplet…
基因数阈值的作用
empty
09
UMI阈值的作用
区分真实细胞与背景噪声 · 死细胞或碎片
UMI
阈值的作用
10
阈值设置的常见策略
经验值 · 统计分布 · 多指标联合筛选
阈值设置的常见策…
经验值
11
基于线粒体比例的过滤
高线粒体占比细胞的生物学含义与阈值选…
基于线粒体比例的…
高线粒体占比细胞…
12
基于双细胞预测的过滤
使用DoubletFinder · Scrublet等工具
基于双细胞预测的…
DoubletFinde…
13
阈值设置的统计方法
AUCell · miQC · Knee/Inflection po…
阈值设置的统计方…
AUCell
14
可视化诊断(上)
Violin Plot展示基因数 · UMI数 · 线粒体比例的分布
可视化诊断
Violin
15
可视化诊断(下)
Feature Scatter(如U… · 颜色标记线粒体占比)
可视化诊断
Feature
16
阈值设置的自动化工具
umi_tools · Seurat的FilterCells · scanpy的filter_cell…
阈值设置的自动化…
umi
17
不同组织类型的阈值差异
PBMC vs 组织样本 vs 肿瘤…
不同组织类型的阈…
PBMC
18
不同测序平台的阈值差异
10x v2/v3 · Drop-seq · BD Rhapsody对比
不同测序平台的阈…
v2/v3
19
阈值设置的验证方法
通过降维聚类前后变化 · marker基因表达验证
阈值设置的验证方…
通过降维聚类前后…
20
错误阈值导致的后果
过度过滤丢失稀有细胞类型 vs 过滤…
错误阈值导致的后…
vs
21
案例实战(一)
人类PBMC数据——从Barcode…
案例实战
PBMC
22
案例实战(二)
小鼠脑组织数据——高异质性样本的阈值…
案例实战
小鼠脑组织数据
23
案例实战(三)
肿瘤样本数据——低质量细胞与恶性细胞…
案例实战
肿瘤样本数据
24
阈值设置的最佳实践
多数据合并时的统一阈值 vs 独立阈…
阈值设置的最佳实…
vs
25
参数调优经验
如何通过迭代调整阈值使聚类稳定 · 差异基因富集
参数调优经验
如何通过迭代调整…
26
常见问题与避坑指南
batch effect · UMI饱和度 · 细胞捕获效率波动
常见问题
避坑指南
27
流程自动化脚本
使用Python/R一键生成QC报告…
流程自动化脚本
Python/R
28
结果报告生成
用HTML/PDF输出过滤前后的统计…
结果报告生成
HTML/PDF
29
后续分析影响讨论
阈值对降维 · 聚类 · 差异表达
后续分析影响讨论
阈值对降维
30
课程总结与资源推荐
核心要点复盘 · 参考文献 · 工具链接
课程总结
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