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蛋白表达载体与宿主选型工程

共计 30 章节
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01
蛋白表达系统总览
目标=从基因到功能蛋白的工程化路径 · 原核与真核表达系统的核心差异与选型决…
蛋白表达系统总览目标=从基因到功…
02
表达载体元件解析
目标=启动子 · 核糖体结合位点 · 终止子
表达载体元件解析目标=启动子
03
宿主细胞选型原则
目标=大肠杆菌 · 枯草芽孢杆菌 · 酵母
宿主细胞选型原则目标=大肠杆菌
04
大肠杆菌表达宿主工程
目标=BL21(DE3) · Rosetta · Origami等菌株的基因型差异与匹…
大肠杆菌表达宿主…BL21
05
大肠杆菌表达载体实战
目标=pET · pGEX · pMAL
大肠杆菌表达载体…pET
06
包涵体形成与可溶性表达优化
目标=融合标签 · 低温诱导 · 分子伴侣共表达与培养条件调控
包涵体形成可溶性表达优化
07
酵母表达系统选型
目标=毕赤酵母 · 酿酒酵母的启动子（AOX1 · GAL1）
酵母表达系统选型目标=毕赤酵母
08
酵母表达工程案例
目标=人源蛋白 · 膜蛋白在毕赤酵母中的高密度发酵与糖基…
酵母表达工程案例目标=人源蛋白
09
昆虫杆状病毒表达系统
目标=AcMNPV · Bacmid · Sf9/High Five细胞与pF…
昆虫杆状病毒表达…AcMNPV
10
哺乳动物细胞表达载体设计
目标=CMV · EF1α启动子 · IRES
哺乳动物细胞表达…CMV
11
CHO与HEK293宿主选型
目标=悬浮驯化 · 无血清培养 · 转染方法与表达产量优化
CHOHEK293
12
慢病毒与逆转录病毒载体
目标=基因整合 · 长期表达与在稳定细胞株构建中的应用
慢病毒逆转录病毒载体
13
无细胞蛋白表达系统
目标=大肠杆菌 · 小麦胚芽 · 兔网状红细胞裂解物的载体设计与应用场…
无细胞蛋白表达系…目标=大肠杆菌
14
标签工程与纯化策略
目标=His · GST · MBP
标签工程纯化策略
15
信号肽与分泌表达
目标=原核与真核信号肽选择 · 周质空间表达 · 分泌到培养基的工程化
信号肽分泌表达
16
膜蛋白表达与载体宿主匹配
目标=去垢剂 · 脂质体 · 纳米盘辅助与GFP融合筛选策略
膜蛋白表达载体宿主匹配
17
毒性蛋白与难表达蛋白
目标=低拷贝载体 · 严紧调控启动子 · 毒性中和与共表达策略
毒性蛋白难表达蛋白
18
翻译后修饰与宿主选择
目标=磷酸化 · 糖基化 · 二硫键形成对宿主细胞机器的影响
翻译后修饰宿主选择
19
密码子优化与mRNA结构
目标=宿主偏好性 · GC含量 · 二级结构对表达量的影响与设计工具
mRNA密码子优化
20
启动子与诱导条件工程
目标=IPTG · 阿拉伯糖 · 温度
启动子诱导条件工程
21
高密度发酵与工艺放大
目标=补料分批 · 恒化培养 · 代谢副产物控制与表达稳定性
高密度发酵工艺放大
22
表达载体稳定性与丢失
目标=抗生素压力 · 质粒拷贝数 · 分离稳定性与宿主突变防控
表达载体稳定性丢失
23
蛋白折叠与二硫键形成
目标=周质空间 · 细胞质氧化环境 · Dsb系统与共表达折叠酶
蛋白折叠二硫键形成
24
表达筛选与高通量检测
目标=荧光报告 · 免疫印迹 · ELISA
表达筛选高通量检测
25
从表达筛选到纯化工艺
目标=亲和层析 · 离子交换 · 分子筛与标签切除的衔接设计
从表达筛选到纯化…目标=亲
26
表达载体与宿主的法规与质控
目标=GMP要求 · 细胞库构建 · 载体安全性评价与批次放行
表达载体宿主的法规
27
工业案例一
目标=胰岛素类似物在大肠杆菌中的表达 · 复性与纯化工艺选型
工业案例一目标=胰岛素类似…
28
工业案例二
目标=单克隆抗体在CHO细胞中的载体… · 稳定池构建与灌流培养
工业案例二CHO
29
工业案例三
目标=病毒样颗粒在昆虫细胞或酵母中的…
工业案例三目标=病毒样颗粒
30
选型决策综合实战
目标=给定目标蛋白特性 · 产量 · 修饰与成本约束
选型决策综合实战目标=给定目标蛋…