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大肠杆菌重组蛋白表达工程

共计 30 章节
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01
课程导入与工程全貌
目标=大肠杆菌重组蛋白表达工程的定义 · 核心目标 · 典型流程
课程导入工程全貌
02
表达宿主选择与工程化改造
目标=BL21(DE3) · Rosetta · Origami
表达宿主选择工程化改造
03
表达载体系统设计
目标=pET · pGEX · pMAL
表达载体系统设计pET
04
目标基因的密码子优化与序列设计
目标=密码子偏好性 · GC含量 · mRNA二级结构
目标基因的密码子…序列设计
05
表达构建体的克隆与组装实战
目标=限制性酶切 · Gibson组装 · Golden Gate
表达构建体的克隆组装实战
06
诱导表达条件的小试筛选
目标=IPTG浓度 · 诱导温度 · 诱导时机
诱导表达条件的小…IPTG
07
可溶性表达与包涵体形成的平衡调控
目标=融合标签 · 分子伴侣共表达 · 低温诱导
可溶性表达包涵体形成的平衡…
08
包涵体的分离、洗涤与溶解
目标=细胞破碎 · 离心分级 · 洗涤缓冲液优化
包涵体的分离洗涤
09
重组蛋白的体外复性工程
目标=稀释复性 · 透析复性 · 柱上复性与添加小分子辅助折叠剂的工艺…
重组蛋白的体外复…目标=稀释复性
10
亲和标签的选择与纯化工艺
目标=His-tag · GST-tag · MBP-tag
标签的选择纯化工艺
11
离子交换与疏水层析精纯
目标=根据等电点与疏水性设计纯化步骤 · 梯度优化与分辨率提升方法
离子交换疏水层析精纯
12
凝胶过滤层析与缓冲液置换
目标=分子量差异分离 · 聚集体去除 · 脱盐与储存缓冲液匹配
凝胶过滤层析缓冲液置换
13
标签切除与纯化后处理
目标=蛋白酶选择 · 酶切条件优化 · 二次纯化与标签去除效果验证
标签切除纯化后处理
14
重组蛋白表达水平的检测与定量
目标=SDS-PAGE · Western blot · BCA
重组蛋白表达水平…定量
15
重组蛋白的活性分析与功能验证
目标=酶活测定 · 结合实验 · 生物活性检测与结构完整性评估
重组蛋白的活性分…功能验证
16
表达条件的响应面优化
目标=Plackett-Burman… · 中心复合设计 · Box-Behnken设计与数据分析
表达条件的响应面…Plackett-Bur…
17
高密度发酵与补料分批策略
目标=生物反应器参数控制 · 比生长速率 · 补料方式与代谢副产物抑制
高密度发酵补料分批策略
18
大肠杆菌表达系统的代谢负担与应激响应
目标=热休克 · 氧化应激 · 乙酸积累与细胞裂解对产量的影响
大肠杆菌表达系统…应激响应
19
无细胞蛋白合成系统
目标=提取物制备 · 能量再生 · 模板设计
无细胞蛋白合成系…目标=提取物制备
20
共表达与多亚基复合物组装
目标=分子伴侣 · 二硫键形成酶 · 多基因操纵子与化学计量平衡策略
共表达多亚基复合物组装
21
毒性蛋白与膜蛋白的表达策略
目标=毒性调控 · 低拷贝载体 · 膜蛋白增溶
毒性蛋白膜蛋白的表达策略
22
重组蛋白的翻译后修饰与折叠
目标=二硫键 · N端甲硫氨酸切除 · 乙酰化
重组蛋白的翻译后…折叠
23
表达系统的规模化放大与工艺转移
目标=从摇瓶到反应器的参数换算 · 氧传递 · 混合时间与放大准则
表达系统的规模化…工艺转移
24
重组蛋白的稳定性与制剂初步
目标=缓冲液 · pH · 离子强度
重组蛋白的稳定性制剂初步
25
质量控制与表征技术
目标=纯度 · 聚集 · 电荷变异
质量控制表征技术
26
表达失败案例诊断与故障排除
目标=无表达 · 低表达 · 截短
表达失败案例诊断故障排除
27
成本控制与工艺经济性分析
目标=培养基成本 · 诱导剂成本 · 纯化树脂寿命
成本控制工艺经济性分析
28
自动化与高通量表达筛选
目标=微孔板 · 微流控 · 液体处理工作站与数据分析在表达优化中…
自动化高通量表达筛选
29
重组蛋白表达工程的数据管理与可重复性
目标=实验记录 · 质粒图谱 · 序列验证
重组蛋白表达工程…可重复性
30
综合实战项目
目标=从基因到活性蛋白的完整工程流程… · 执行 · 记录与结果汇报
综合实战项目目标=从基因到活…