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蛋白可溶性表达优化工程

共计 30 章节
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01
课程导入与可溶性表达问题界定
目标=学习目标 · 蛋白可溶性表达的核心挑战 · 包涵体形成原因
课程导入可溶性表达问题界…
02
目标蛋白可溶性表达可行性评估
目标=序列特征分析 · 疏水性/等电点/二硫键预测 · 跨膜区与信号肽识别
目标蛋白可溶性表…目标=序列特征分…
03
表达宿主选择与工程化改造
目标=大肠杆菌 · 枯草芽孢杆菌 · 酵母
表达宿主选择工程化改造
04
表达载体元件优化
目标=启动子强度与诱导条件 · 复制子拷贝数 · 核糖体结合位点
表达载体元件优化目标=启动子强度
05
培养与诱导条件系统优化
目标=温度 · 诱导时机 · 诱导剂浓度
培养诱导条件系统优化
06
分子伴侣与折叠辅助因子共表达
目标=GroEL/ES · DnaK/J/GrpE · ClpB
分子伴侣折叠辅助因子共表…
07
蛋白标签与融合策略工程
目标=His · GST · MBP
蛋白标签融合策略工程
08
定向进化与理性设计提升可溶性
目标=易错PCR · DNA shuffling · 定点突变
定向进化理性设计提升可溶…
09
共表达与代谢工程辅助折叠
目标=共表达tRNA · 稀有密码子优化 · ATP再生系统
共表达代谢工程辅助折叠
10
无细胞蛋白合成系统优化
目标=细胞提取物制备 · 能量再生 · 模板设计
无细胞蛋白合成系…目标=细胞提取物…
11
高通量筛选与可溶性检测方法
目标=荧光报告 · 分裂GFP · ELISA
高通量筛选可溶性检测方法
12
包涵体复性与体外折叠工程
目标=包涵体洗涤 · 溶解 · 稀释复性
包涵体复性体外折叠工程
13
膜蛋白与难溶蛋白可溶性表达策略
目标=去垢剂 · 脂质体 · 纳米盘
膜蛋白难溶蛋白可溶性表…
14
二硫键依赖蛋白的可溶性表达
目标=氧化性细胞质工程 · Dsb系统共表达 · 硫氧还蛋白还原酶缺陷株
二硫键依赖蛋白的…目标=氧化性细胞…
15
糖基化与翻译后修饰对可溶性的影响
目标=N-/O-糖基化位点工程 · 糖基化抑制剂 · 酵母与哺乳动物表达系统
糖基化翻译后修饰对可溶…
16
蛋白酶缺陷与稳定性提升
目标=宿主蛋白酶敲除 · 抑制肽添加 · 培养温度与pH调控
蛋白酶缺陷稳定性提升
17
表达条件响应面与统计优化
目标=Plackett-Burman · 响应面法 · 中心复合设计
表达条件响应面统计优化
18
可溶性表达过程放大与工艺转移
目标=摇瓶到发酵罐 · 氧传递 · 混合时间
可溶性表达过程放…工艺转移
19
纯化工艺与可溶性表达协同设计
目标=亲和捕获 · 离子交换 · 疏水层析
纯化工艺可溶性表达协同设…
20
蛋白稳定性与制剂优化
目标=热稳定性 · 冻融稳定性 · 聚集倾向
蛋白稳定性制剂优化
21
案例研究一
目标=工业酶的可溶性表达优化 · 宿主与载体选择 · 发酵条件
案例研究一目标=工业酶的可…
22
案例研究二
目标=治疗性抗体的可溶性表达 · 载体设计 · 宿主细胞工程
案例研究二目标=治疗性抗体…
23
案例研究三
目标=膜蛋白受体的可溶性表达 · 融合伴侣 · 去垢剂筛选
案例研究三目标=膜蛋白受体…
24
案例研究四
目标=病毒抗原蛋白的可溶性表达 · 二硫键工程 · 昆虫细胞表达
案例研究四目标=病毒抗原蛋…
25
案例研究五
目标=多结构域蛋白的可溶性表达 · 共表达 · 连接肽设计
案例研究五目标=多结构域蛋…
26
人工智能与机器学习辅助可溶性预测
目标=序列特征编码 · 数据集构建 · 模型训练
人工智能机器学习辅助可溶…
27
自动化与微流控在可溶性筛选中的应用
目标=液滴微流控 · 纳升培养 · 机器人液体处理
自动化微流控
28
可溶性表达工程中的质量控制与法规考量
目标=批次一致性 · 杂质谱 · 活性检测
可溶性表达工程质量控制
29
实验设计与故障排除实战
目标=常见问题诊断 · 对照设置 · 变量控制
实验设计故障排除实战
30
课程综合项目
目标=从基因到可溶性蛋白的完整工程实… · 方案设计 · 实验执行
课程综合项目目标=从基因到可…