4. 样本接收与预处理决策

样本接收是测序前处理链条上第一个“可拦截错误”的关口。真正决定后续数据质量的，往往不是建库试剂盒，而是此刻对样本状态的判断。接收环节的核心任务可以概括为三件事：看外观、量体积与浓度、评估三类常见干扰（溶血、脂血、黄疸），并据此做出接收、补救或拒收的决策。本节围绕这条决策链展开，给出可落地的判断阈值与处置规则。

一、外观检查：先看“不该出现的东西”

外观检查不需要仪器，但信息量极大。接收时应在白色背景和黑色背景下各观察一次，重点记录以下异常：

• 颜色异常：红色提示溶血或混入红细胞；乳白浑浊提示脂血；深黄至棕黄提示黄疸或样本陈旧；褐色/黑色提示严重氧化或污染。
• 凝块与纤维蛋白丝：血液样本中若出现胶冻状凝块，说明抗凝不充分，会堵塞自动化提取柱或导致裂解不完全，核酸得率显著下降。
• 颗粒与沉淀：组织匀浆、痰液、粪便样本中的未消化颗粒会带入抑制剂，需在提取前离心或过滤。
• 容器与密封：管盖松动、管壁渗漏、标签模糊或与申请单不符，属于可追溯性问题，应优先处理。

外观检查的结论应直接写入接收记录，而不是仅凭记忆。因为后续若出现提取失败或数据异常，外观记录是回溯的第一手证据。

二、体积与浓度初筛：判断“够不够用”

体积与浓度共同决定核酸总量。测序建库对投入量有明确下限，例如常规WGS建库常要求DNA总量≥100 ng，RNA-seq常要求总RNA≥200 ng。若样本浓度低但体积充足，可通过浓缩补救；若体积不足，则几乎无法挽回。

初筛时建议同时记录三个量：样本总体积、实测浓度、估算总量。浓度测定优先使用荧光染料法（如Qubit），因为紫外分光光度法（如NanoDrop）会受RNA、游离核苷酸和蛋白干扰，读数偏高。一个常见的教学示例：某血液样本体积1.5 mL，Qubit测得DNA浓度8 ng/μL，则总量约12 μg，满足建库需求；若浓度仅0.5 ng/μL，总量约0.75 μg，虽仍高于下限，但需评估纯度是否达标。

三、溶血、脂血、黄疸干扰评估

这三类干扰在分光光度法中有经典的表现：溶血样本在414 nm附近有血红蛋白吸收峰，脂血样本在整体波长上表现为散射导致的吸光度抬升，黄疸样本在450 nm附近有胆红素吸收峰。它们对下游的影响机制不同：

• 溶血：释放的血红蛋白和铁离子会抑制PCR聚合酶活性，同时游离血红素可螯合Mg²⁺，导致扩增效率下降。轻度溶血（淡粉色）通常可接受，中度以上（红色）建议重新采样或增加洗涤步骤。
• 脂血：乳糜微粒会干扰磁珠法提取中的磁珠分散与结合，导致得率波动。脂血样本建议延长离心时间，取下层清液，或采用柱式提取替代磁珠法。
• 黄疸：胆红素是已知的PCR抑制剂，高浓度胆红素会显著压低扩增曲线。黄疸样本建议增加裂解后洗涤次数，或使用含BSA的扩增体系部分中和抑制。

评估时不能只看NanoDrop的A260/A280比值。溶血样本的A260/A280可能仍在1.8附近，但实际已受血红蛋白干扰。更可靠的做法是结合A260/A280、A260/A230以及样本外观三者综合判断，必要时用荧光法复测浓度。

四、拒收与补救规则

拒收不是“一刀切”，而是按缺陷类型和可修复程度分级处理。以下规则可作为实验室SOP的参考框架：

需要强调的是，补救措施本身也有代价。例如浓缩操作会引入额外的柱膜吸附损失，可能使原本就低的样本进一步降解；增加洗涤次数会降低得率。因此，补救决策应基于“补救后是否仍能满足建库下限”的预判，而不是“先救了再说”。

五、接收记录的字段建议

一份可追溯的接收记录至少应包含：样本编号、样本类型、接收时间、外观描述、体积、浓度测定方法与结果、A260/A280、A260/A230、干扰评估结论、处置决定（接收/补救/拒收）、操作人。这些字段不必全部手写，但必须在LIMS或纸质记录中可查。对于需要补救的样本，还应记录补救方式与补救后复测结果，形成完整的“接收—判断—处置—复测”闭环。

把接收环节做扎实，后续提取和建库的失败率会明显下降。很多“建库失败”的根因，其实在样本接收时就已经埋下。外观、体积、浓度和三类干扰的评估，本质上是在用最低成本拦截最高风险。