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CRISPR细胞系构建与验证

共计 30 章节
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01
CRISPR细胞系构建总览
目标=从基因编辑原理到稳定细胞系交付… · 关键节点与常见失败模式
CRISPR细胞系构建总览
02
靶基因与编辑策略选择
目标=敲除 · 敲入 · 点突变
靶基因编辑策略选择
03
sgRNA设计与脱靶预测
目标=在线工具使用 · 评分参数解读 · 脱靶位点评估与候选sgRNA优先级排…
sgRNA设计
04
Cas9与衍生编辑器选择
目标=野生型Cas9 · nickase · dCas9融合蛋白
Cas9衍生编辑器选择
05
递送方法比较与实操
目标=脂质体 · 电转 · 慢病毒
递送方法比较实操
06
敲除细胞系构建实战
目标=从sgRNA克隆到单克隆筛选的… · 时间节点与关键控制点
敲除细胞系构建实…sgRNA
07
同源重组敲入策略设计
目标=供体模板设计 · 同源臂长度 · PAM突变与筛选标记整合方案
同源重组敲入策略…目标=供体模板设…
08
点突变与精确编辑细胞系构建
目标=碱基编辑器与先导编辑器的实验设… · 效率提升与副产物控制
点突变精确编辑细胞系构…
09
慢病毒与逆转录病毒载体构建
目标=包装 · 滴度测定 · 感染复数优化与稳定整合细胞系制备
慢病毒逆转录病毒载体构…
10
转座子与附加体载体系统
目标=piggyBac · Sleeping Beauty等非病…
转座子附加体载体系统
11
单克隆分离与扩增
目标=有限稀释 · 克隆环 · 流式分选与自动化克隆挑选的操作要点与…
单克隆分离扩增
12
阳性克隆初步筛选
目标=PCR · 限制性酶切 · T7E1/Surveyor核酸酶检测…
阳性克隆初步筛选PCR
13
靶位点基因型精确鉴定
目标=Sanger测序 · TA克隆 · NGS深度测序与CRISPResso…
靶位点基因型精确…Sanger
14
脱靶效应检测与评估
目标=GUIDE-seq · CIRCLE-seq · DISCOVER-seq与全基因组测…
脱靶效应检测评估
15
脱靶效应控制与补救
目标=高保真Cas9变体 · 截短sgRNA · 双nickase策略与候选克隆二次验…
脱靶效应控制补救
16
基因表达验证
目标=RT-qPCR · Western blot · 免疫荧光与流式细胞术在敲除/敲入细胞…
基因表达验证RT-qPCR
17
功能验证实验设计
目标=增殖 · 凋亡 · 迁移
功能验证实验设计目标=增殖
18
细胞系身份鉴定与质控
目标=STR分型 · 支原体检测 · 核型分析与种属鉴定的标准操作与接受标…
细胞系身份鉴定质控
19
脱靶无关克隆变异控制
目标=单克隆传代稳定性 · 基因组不稳定性与实验重复设计中的注意…
脱靶无关克隆变异…目标=单克隆传代…
20
条件性敲除与诱导型系统
目标=Cre-loxP · Tet-On/Off · 降解子等时空可控编辑细胞系的构建与验…
条件性敲除诱导型系统
21
报告基因敲入细胞系
目标=荧光蛋白 · 荧光素酶敲入策略 · 表达验证与在药物筛选中的应用
报告基因敲入细胞…目标=荧光蛋白
22
内源标签细胞系构建
目标=HA · Flag · GFP等标签敲入方案
内源标签细胞系构…HA
23
悬浮与难转染细胞系编辑
目标=CHO · HEK293F · Jurkat
悬浮难转染细胞系编辑
24
干细胞与诱导多能干细胞编辑
目标=hESC/iPSC的CRISP… · 克隆传代 · 多能性维持与验证
干细胞诱导多能干细胞编…
25
高通量细胞系构建与筛选
目标=阵列式sgRNA文库 · 池化筛选 · 条形码追踪与NGS数据分析
高通量细胞系构建筛选
26
自动化与微流控平台
目标=液体处理工作站 · 单细胞打印与微流控芯片在细胞系构建中…
自动化微流控平台
27
CRISPR细胞系构建的法规与伦理
目标=生物安全 · 知情同意 · 基因编辑细胞产品的监管要求与合规路径
CRISPR细胞系构建的法规
28
数据记录与可重复性
目标=实验设计 · 原始数据管理 · 电子实验记录与跨批次重复的关键规范
数据记录可重复性
29
故障排查与优化案例
目标=低编辑效率 · 脱靶高 · 单克隆难存活
故障排查优化案例
30
课程综合实战
目标=从靶点选择到验证报告 · 完成一个完整CRISPR细胞系构建项…
课程综合实战目标=从靶点选择…