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CRISPR基因敲除实验工程

共计 30 章节
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01
CRISPR基因敲除工程导论
目标=基因敲除的定义 · CRISPR技术发展简史 · 实验工程的整体流程与关键里程碑
CRISPR基因敲除工程导论
02
目标基因与敲除策略选择
目标=如何根据基因功能 · 表达模式 · 冗余基因和表型需求确定敲除策略（完全…
目标基因敲除策略选择
03
CRISPR-Cas9系统组件解析
目标=Cas9蛋白结构域 · sgRNA设计原则 · PAM序列要求
CRISPR-Cas9系统组件解析
04
sgRNA设计与脱靶预测
目标=在线工具（CRISPOR · Benchling · CHOPCHOP）使用
sgRNA设计
05
敲除载体构建与克隆
目标=常用载体类型（px330 · lentiCRISPR） · 酶切连接
敲除载体构建克隆
06
细胞培养与转染方法
目标=贴壁/悬浮细胞培养要点 · 脂质体转染 · 电转
细胞培养转染方法
07
CRISPR递送系统选择
目标=质粒DNA · mRNA · RNP复合物递送比较
CRISPR递送系统选择
08
敲除效率的初步检测
目标=T7E1酶切 · Surveyor核酸酶 · Sanger测序
敲除效率的初步检…T7E1
09
单克隆细胞筛选与扩增
目标=有限稀释法 · 克隆环挑取 · 流式分选
单克隆细胞筛选扩增
10
基因型鉴定与测序验证
目标=基因组DNA提取 · PCR扩增靶区域 · TA克隆测序
基因型鉴定测序验证
11
脱靶效应检测与评估
目标=GUIDE-seq · CIRCLE-seq · DISCOVER-seq
脱靶效应检测评估
12
功能验证与表型分析
目标=Western blot · qPCR · 免疫荧光
功能验证表型分析
13
多基因敲除与组合策略
目标=多重sgRNA载体 · 顺序敲除 · 诱导型CRISPR
多基因敲除组合策略
14
条件性基因敲除工程
目标=Cre-loxP系统 · Flp-FRT系统 · 组织特异性启动子
条件性基因敲除工…Cre-loxP
15
原代细胞与干细胞敲除
目标=iPSC · ESC · T细胞
原代细胞干细胞敲除
16
动物模型中的基因敲除
目标=小鼠受精卵注射 · 胚胎电转 · 嵌合体生成
动物模型基因敲除
17
植物基因敲除工程
目标=农杆菌介导转化 · 原生质体转染 · 再生植株
植物基因敲除工程目标=农杆菌介导…
18
微生物基因敲除
目标=细菌 · 酵母 · 真菌的CRISPR系统选择
微生物基因敲除目标=细菌
19
高通量筛选与文库构建
目标=全基因组CRISPR敲除文库 · 亚文库设计 · 慢病毒包装
高通量筛选文库构建
20
生物信息学分析流程
目标=测序数据质控 · 比对 · Indel识别
生物信息学分析流…目标=测序数据质…
21
实验对照与可重复性
目标=阳性/阴性对照sgRNA · 非靶向对照 · 生物学重复
实验对照可重复性
22
常见问题与故障排除
目标=低敲除效率 · 细胞毒性 · 脱靶高
常见问题故障排除
23
CRISPR敲除的伦理与法规
目标=基因编辑伦理准则 · 临床试验监管 · 知识产权
CRISPR敲除的伦理
24
CRISPR敲除在疾病建模中的应用
目标=癌症 · 遗传病 · 神经退行性疾病
CRISPR敲除
25
CRISPR敲除在药物靶点发现中的应用
目标=靶点验证 · 耐药机制研究 · 药物协同筛选
CRISPR敲除
26
CRISPR敲除在农业与合成生物学中的应用
目标=作物改良 · 抗病育种 · 代谢通路改造
CRISPR敲除
27
实验方案设计与项目实战
目标=从课题立项到敲除策略 · 载体构建 · 细胞实验
实验方案设计项目实战
28
数据分析与可视化实战
目标=使用CRISPResso2 · MAGeCK · Python/R进行Indel分析
数据分析可视化实战
29
论文撰写与成果发表
目标=实验记录整理 · 图表制作 · 方法学描述
论文撰写成果发表
30
前沿进展与未来方向
目标=碱基编辑 · 先导编辑 · CRISPR相关转座酶
前沿进展未来方向