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CRISPR精准敲入与修复工程

共计 30 章节
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01
精准敲入与修复工程导论
目标=CRISPR精准编辑的定义 · 核心挑战 · 工程化思维与课程路线图
精准敲入修复工程导论
02
CRISPR-Cas系统在敲入与修复中的工作机制
目标=Cas9 · Cas12 · Cas13等效应蛋白的切割特性与修复…
CRISPR-Cas系统
03
DNA双链断裂修复通路与精准敲入
目标=NHEJ · HDR · MMEJ
DNA双链断裂修复通路
04
供体模板设计原理
目标=同源臂长度 · 不对称同源臂 · PAM突变
供体模板设计原理目标=同源臂长度
05
sgRNA设计与优化
目标=靶向特异性 · 切割效率 · 脱靶预测工具与实验验证策略
sgRNA设计
06
Cas9变体与精准编辑工具
目标=高保真Cas9 · nickase · dCas9融合蛋白与碱基/先导编辑器…
Cas9变体
07
HDR增强策略
目标=细胞周期同步 · 小分子抑制剂 · RAD51/BRCA通路调控与供体递…
HDR增强策略
08
非同源依赖的精准敲入
目标=HITI · HMEJ · CRISPR-RE
非同源依赖的精准…HITI
09
递送系统选择与工程化
目标=质粒 · mRNA · RNP
递送系统选择工程化
10
细胞类型特异性敲入方案
目标=iPSC · 原代T细胞 · 造血干细胞
细胞类型特异性敲…iPSC
11
动物模型中的精准敲入
目标=小鼠 · 大鼠 · 斑马鱼
动物模型精准敲入
12
植物精准敲入与修复
目标=原生质体 · 愈伤组织 · 农杆菌介导与无外源DNA编辑策略
植物精准敲入修复
13
微生物基因组精准敲入
目标=细菌 · 酵母 · 丝状真菌的编辑效率提升与多重编辑
微生物基因组精准…目标=细菌
14
脱靶检测与全基因组保真性评估
目标=GUIDE-seq · CIRCLE-seq · DISCOVER-seq
脱靶检测全基因组保真性评…
15
在靶编辑结果验证
目标=PCR · 限制性酶切 · Sanger测序
靶编辑结果验证PCR
16
敲入效率定量与克隆筛选
目标=有限稀释 · 流式分选 · 报告基因
敲入效率定量克隆筛选
17
大片段敲入与多基因组装
目标=长供体递送 · 连续编辑 · PITCh
大片段敲入多基因组装
18
条件性敲入与时空控制
目标=Cre-loxP · Tet-on/off · 光控
条件性敲入时空控制
19
疾病模型构建中的精准修复
目标=点突变纠正 · exon 跳跃修复 · 显性负突变敲除与功能恢复验证
疾病模型构建精准修复
20
细胞治疗产品中的精准敲入
目标=CAR-T敲入 · TCR替换 · HLA编辑与通用型细胞工程
细胞治疗产品精准敲入
21
基因治疗中的精准修复
目标=血友病 · 镰刀型贫血 · 杜氏肌营养不良与视网膜疾病的策略对比
基因治疗精准修复
22
免疫细胞与干细胞工程实战
目标=T细胞 · NK细胞 · HSC的敲入效率优化与功能评价
免疫细胞干细胞工程实战
23
类器官与器官芯片中的精准编辑
目标=疾病建模 · 药物筛选与修复功能读出
类器官器官芯片
24
高通量筛选与功能基因组学
目标=敲入文库 · 报告系统 · 单细胞测序与表型关联
高通量筛选功能基因组学
25
生物信息学与计算工具
目标=脱靶预测 · 供体设计软件 · NGS数据分析与机器学习优化
生物信息学计算工具
26
质量控制与标准化
目标=细胞库检定 · 编辑一致性 · 脱靶安全性
质量控制标准化
27
伦理、法规与生物安全
目标=体细胞与生殖系编辑边界 · 知情同意 · 知识产权与全球治理
伦理法规
28
案例研究一
目标=镰刀型贫血的HDR精准修复与临…
案例研究一HDR
29
案例研究二
目标=CAR-T中TRAC位点精准敲…
案例研究二CAR-T
30
综合实战与前沿展望
目标=从靶点选择到功能验证的完整项目… · 以及先导编辑 · 表观编辑与递送创新
综合实战前沿展望