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多色流式实验设计与补偿工程

共计 30 章节
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01
课程导入与多色流式全景
目标=明确多色流式实验设计与补偿工程… · 核心术语（荧光 · 通道
课程导入多色流式全景
02
流式细胞仪光学与电子学基础
目标=激光激发 · 荧光发射 · 滤光片组
流式细胞仪光学电子学基础
03
荧光染料与标记策略
目标=荧光素 · 藻胆蛋白 · 量子点
荧光染料标记策略
04
抗原表达密度与染料亮度匹配
目标=根据抗原表达强弱选择荧光团亮度 · 避免弱表达抗原使用暗染料 · 设计抗体滴定实验确定最佳用量
抗原表达密度染料亮度匹配
05
多色Panel设计原则与迭代流程
目标=确定生物学问题 · 选择靶标组合 · 分配荧光通道
Panel多色
06
光谱重叠与溢漏的量化
目标=理解溢漏矩阵 · 光谱重叠系数 · 补偿矩阵的数学关系
光谱重叠溢漏的量化
07
单染对照的制备与陷阱
目标=细胞 · 微珠 · 抗体捕获珠的选择
单染对照的制备陷阱
08
补偿对照与实验管的一致性
目标=补偿对照与实验管在仪器设置 · 电压 · 增益
补偿对照实验管的一致性
09
补偿矩阵的建立与手动调整
目标=从单染数据计算补偿矩阵 · 在采集软件中应用补偿 · 手动微调补偿值的判断标准
补偿矩阵的建立手动调整
10
自动化补偿工具与算法
目标=基于最小二乘 · 稳健回归 · 谱流式解混的自动补偿算法
自动化补偿工具算法
11
光谱流式与全光谱解混
目标=光谱流式原理 · 全光谱采集 · 参考光谱库构建
光谱流式全光谱解混
12
补偿后的数据质量评估
目标=使用补偿矩阵检查 · N×N散点图 · 残差图
补偿后的数据质量…目标=使用补偿矩…
13
多色实验的对照体系设计
目标=生物学对照 · 同型对照 · FMO对照
多色实验的对照体…目标=生物学对照
14
FMO对照与设门策略
目标=FMO对照的制备与适用场景 · 利用FMO确定阳性阈值与设门边界 · 结合生物学阴性群体与FMO进行稳健设…
FMO对照
15
仪器设置与电压优化
目标=PMT电压与增益对信号分辨率 · 溢漏和补偿的影响 · 使用标准化微珠或细胞进行电压滴定
仪器设置电压优化
16
仪器标准化与日常质控
目标=CS&T · QC微珠 · 标准化微球
仪器标准化日常质控
17
样本制备对补偿的影响
目标=组织解离 · 红细胞裂解 · 细胞冻存
样本制备对补偿的…目标=组织解离
18
自发荧光与背景控制
目标=细胞自发荧光的来源与光谱特征 · 选择低自发荧光通道 · 使用自发荧光扣除
自发荧光背景控制
19
死细胞与粘连体排除
目标=死细胞染料（PI · AAD · DAPI
死细胞粘连体排除
20
高参数Panel的通道分配与优化
目标=在18色 · 24色 · 30色以上Panel中分配荧光团
Panel高参数
21
串联染料与降解控制
目标=串联染料（如PE-Cy7 · APC-Cy7 · BV605）的降解机制
串联染料降解控制
22
补偿在设门与定量分析中的传递
目标=补偿矩阵对设门 · 频率统计 · MFI定量
补偿设门
23
多色流式在免疫表型分析中的实战
目标=设计T细胞 · B细胞 · NK细胞
多色流式免疫表型分析
24
多色流式在细胞功能分析中的实战
目标=设计细胞增殖 · 细胞因子 · 磷酸化信号
多色流式细胞功能分析
25
多色流式在干细胞与发育生物学中的实战
目标=设计干细胞标志物 · 分化轨迹 · 侧群分析Panel
多色流式干细胞
26
多色流式在肿瘤免疫微环境中的实战
目标=设计肿瘤浸润淋巴细胞 · 髓系细胞 · 免疫检查点Panel
多色流式肿瘤免疫微环境
27
多色流式在微生物与细胞外囊泡中的应用
目标=设计细菌 · 真菌 · 细胞外囊泡Panel
多色流式微生物
28
补偿失败的诊断与排查
目标=系统排查补偿异常（过补偿 · 欠补偿 · 扩散误差
补偿失败的诊断排查
29
多色实验的标准化与报告规范
目标=建立Panel设计 · 补偿 · 采集
多色实验的标准化报告规范
30
多色流式实验设计与补偿工程的综合项目
目标=从生物学问题出发 · 完成Panel设计 · 抗体滴定
多色流式实验设计补偿工程的综合项…