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RT-PCR转录本检测实验工程

共计 30 章节
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01
RT-PCR转录本检测实验工程导论
目标=课程目标 · RT-PCR在转录本检测中的核心地位 · 实验工程全流程概览
RT-PCR转录本检测实验工…
02
转录本检测的生物学基础
目标=RNA类型与功能 · 转录本结构 · 可变剪接
转录本检测的生物…RNA
03
样本采集与RNA完整性控制
目标=组织/细胞/血液样本采集 · RNase防控 · 样本保存与运输
RNA样本采集
04
总RNA提取与质量鉴定
目标=Trizol法 · 柱式提取法 · 自动化提取平台
RNA提取
05
RNA模板标准化与储存管理
目标=RNA定量 · 纯度判定 · 工作液配制
RNA模板标准化
06
逆转录酶与逆转录反应原理
目标=逆转录酶类型 · RNase H活性 · 反应温度与时间
逆转录酶逆转录反应原理
07
逆转录引物策略选择
目标=Oligo(dT) · 随机引物 · 基因特异性引物
逆转录引物策略选…Oligo
08
逆转录反应体系建立与优化
目标=dNTP · Mg2+ · DTT
逆转录反应体系建…优化
09
cDNA质量评估与储存
目标=cDNA浓度测定 · 电泳/毛细管电泳检查 · 内参扩增验证
cDNA质量评估
10
PCR扩增基本原理与转录本检测
目标=变性 · 退火 · 延伸
PCR扩增基本原理
11
引物设计与转录本特异性
目标=引物长度 · GC含量 · Tm
引物设计转录本特异性
12
探针法与荧光染料法选择
目标=TaqMan探针 · 分子信标 · SYBR Green
探针法荧光染料法选择
13
RT-PCR反应体系与程序优化
目标=缓冲液 · dNTP · Mg2+
RT-PCR反应体系
14
内参与参考基因选择
目标=GAPDH · ACTB · 18S rRNA
内参参考基因选择
15
标准曲线与绝对定量
目标=标准品制备 · 梯度稀释 · Ct值与拷贝数关系
标准曲线绝对定量
16
相对定量与ΔΔCt方法
目标=参照基因归一化 · 校准样本设置 · 扩增效率校正
Ct相对定量
17
一步法与两步法RT-PCR工程选择
目标=反应模式对比 · 适用场景 · 污染风险
RT-PCR一步法
18
多重RT-PCR转录本检测
目标=多引物/探针组合 · 荧光通道分配 · 竞争抑制
RT-PCR多重
19
数字PCR在转录本检测中的应用
目标=微滴/芯片数字PCR原理 · 绝对定量优势 · 低丰度转录本检测
PCR数字
20
RT-PCR实验对照设置
目标=阳性对照 · 阴性对照 · 无模板对照
RT-PCR实验对照设置
21
污染控制与防污染工程
目标=气溶胶污染 · 扩增产物污染 · UDG/dUTP系统
污染控制防污染工程
22
扩增曲线与熔解曲线分析
目标=基线设置 · 阈值确定 · Ct值读取
扩增曲线熔解曲线分析
23
RT-PCR数据分析与统计
目标=原始数据导出 · 异常值剔除 · 技术重复与生物学重复
RT-PCR数据分析
24
转录本检测灵敏度与特异性验证
目标=检测限 · 定量限 · 交叉反应
转录本检测灵敏度特异性验证
25
临床样本转录本检测实战
目标=RNA病毒检测 · 基因融合转录本 · 肿瘤标志物
临床样本转录本检…RNA
26
植物与微生物转录本检测实战
目标=植物组织RNA提取难点 · 真菌/细菌转录本检测 · 环境样本抑制物去除
植物微生物转录本检测…
27
单细胞RT-PCR转录本检测
目标=单细胞分离 · 微量RNA逆转录 · 扩增偏倚
RT-PCR单细胞
28
RT-PCR实验记录与可追溯性
目标=实验记录规范 · 试剂批次追踪 · 仪器校准
RT-PCR实验记录
29
故障排查与质量控制体系
目标=无扩增 · Ct偏大 · 重复性差
故障排查质量控制体系
30
RT-PCR转录本检测实验工程综合项目
目标=从样本到报告的全流程设计 · SOP撰写 · 质控点设置
RT-PCR转录本检测实验工…