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PCR污染控制与假阳性排查

共计 30 章节
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01
PCR污染与假阳性的本质
目标=区分污染 · 假阳性 · 非特异性扩增与交叉反应
PCR污染
02
污染发生的全流程地图
目标=从样本采集 · 核酸提取 · 试剂配制
污染发生的全流程…目标=从样本采集
03
实验室分区与气流控制
目标=讲解试剂准备区 · 样本处理区 · 扩增区
实验室分区气流控制
04
设备与耗材的防污染配置
目标=移液器 · 离心机 · 生物安全柜
设备耗材的防污染配置
05
试剂与引物的污染防控
目标=分装 · 冻融 · 保存
试剂引物的污染防控
06
样本处理中的交叉污染控制
目标=采样管 · 保存液 · 核酸提取步骤
样本处理交叉污染控制
07
核酸提取与模板质量评估
目标=提取效率 · 抑制剂残留 · 模板浓度与纯度对假阳性的影响
核酸提取模板质量评估
08
PCR体系配制与加样操作规范
目标=预混液配制 · 分液 · 加模板的顺序
PCR体系配制
09
扩增与产物分析中的污染风险
目标=扩增后开盖 · 电泳 · 凝胶染色
扩增产物分析
10
对照体系的科学设置
目标=阴性对照 · 空白对照 · 阳性对照
对照体系的科学设…目标=阴性对照
11
假阳性结果的初步判断
目标=根据扩增曲线 · Ct值 · 熔解曲线
假阳性结果的初步…目标=根据扩增曲…
12
污染源排查的决策树
目标=从阴性对照起峰 · 样本间异常一致 · 空白孔扩增等现象出发
污染源排查的决策…目标=从阴性对照…
13
环境监测与拭子采样
目标=对工作台 · 移液器 · 离心机
环境监测拭子采样
14
空气与气溶胶污染监测
目标=介绍沉降平板 · 空气采样器 · 气溶胶核酸检测等方法
空气气溶胶污染监测
15
核酸去除与表面去污
目标=次氯酸钠 · DNA去除剂 · 紫外照射
核酸去除表面去污
16
移液器与设备的深度清洁
目标=拆解 · 擦拭 · 紫外
移液器设备的深度清洁
17
试剂与耗材的污染排查
目标=通过更换批号 · 分装 · 重新配制
试剂耗材的污染排查
18
引物与探针的特异性验证
目标=检查引物二聚体 · 非特异性扩增 · 探针交叉反应
引物探针的特异性验证
19
dNTP、酶与缓冲液的污染排查
目标=评估组分被核酸模板污染的可能性 · 使用无核酸酶水 · 新批号试剂
dNTP缓冲液的污染排查
20
核酸提取试剂与耗材的污染排查
目标=针对裂解液 · 磁珠 · 洗脱液
核酸提取试剂耗材的污染排查
21
qPCR假阳性的曲线特征与判读
目标=分析扩增曲线形态 · Ct值分布 · 熔解峰
qPCR假阳性的曲线特征
22
终点PCR假阳性的电泳与测序验证
目标=通过条带大小 · 引物二聚体 · 非特异性条带
PCR终点
23
数字PCR与高通量测序中的污染控制
目标=微滴/芯片分区 · 索引 hopping · 交叉污染
PCR数字
24
CRISPR、等温扩增与POCT场景的污染控制
目标=LAMP · RPA · CRISPR检测中气溶胶
CRISPRPOCT
25
临床样本中的假阳性排查
目标=结合患者病史 · 采样质量 · 用药
临床样本假阳性排查
26
法医与亲缘鉴定中的污染排查
目标=低拷贝DNA · 接触DNA · 混合样本
法医亲缘鉴定
27
食品与环境检测中的假阳性排查
目标=基质抑制 · 非目标核酸 · 死菌/活菌区分
食品环境检测
28
污染事件应急处理
目标=发现假阳性后的立即隔离 · 停止操作 · 封存试剂
污染事件应急处理目标=发现假阳性…
29
防污染SOP与质量管理体系
目标=编写可执行的标准操作程序 · 记录表格 · 人员培训
SOP防污染
30
综合实战与复盘
目标=给定一个假阳性案例 · 完成从现象记录 · 对照分析
综合实战复盘