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酵母与细菌表达载体构建

共计 30 章节
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01
课程导入与载体构建全景
目标=酵母与细菌表达载体的定义 · 分类 · 应用场景及完整构建流程概览
课程导入载体构建全景
02
细菌表达系统基础
目标=大肠杆菌表达系统的优势与局限 · 常用菌株（BL21(DE3) · Rosetta等）的基因型与选择依据
细菌表达系统基础目标=大肠杆菌表…
03
酵母表达系统基础
目标=酿酒酵母 · 毕赤酵母 · 多形汉逊酵母的表达特性
酵母表达系统基础目标=酿酒酵母
04
表达载体核心元件解析
目标=复制起点 · 筛选标记 · 启动子
表达载体核心元件…目标=复制起点
05
细菌启动子与调控元件
目标=T7 · lac · tac
细菌启动子调控元件
06
酵母启动子与调控元件
目标=AOX1 · GAP · ADH1
酵母启动子调控元件
07
筛选标记与报告基因
目标=抗生素抗性基因 · 营养缺陷型标记 · 荧光报告基因在酵母与细菌载体中的应用…
筛选标记报告基因
08
目标基因的获取与优化
目标=PCR扩增 · 密码子优化 · 信号肽添加
目标基因的获取优化
09
限制性内切酶与连接法构建载体
目标=酶切位点选择 · 载体与插入片段的酶切 · 连接
限制性内切酶连接法构建载体
10
无缝克隆与重组技术
目标=Gibson组装 · In-Fusion · SLIC
无缝克隆重组技术
11
细菌表达载体的构建实战
目标=以pET系列为例 · 从引物设计到重组质粒验证的完整流程
细菌表达载体的构…pET
12
酵母表达载体的构建实战
目标=以pPICZα为例 · 从基因克隆到线性化转化质粒的制备流程
酵母表达载体的构…pPICZ
13
载体构建中的常见问题与排查
目标=酶切不完全 · 连接效率低 · 转化子少
载体构建常见问题
14
细菌转化与表达筛选
目标=热激法 · 电转化法 · 阳性克隆的菌落PCR
细菌转化表达筛选
15
酵母转化与表达筛选
目标=LiAc/SS-DNA/PEG… · 电转化法 · 营养缺陷型筛选
酵母转化表达筛选
16
细菌表达条件优化
目标=诱导温度 · IPTG浓度 · 诱导时间
细菌表达条件优化目标=诱导温度
17
酵母表达条件优化
目标=甲醇诱导浓度 · 诱导时间 · 温度
酵母表达条件优化目标=甲醇诱导浓…
18
表达产物的检测与分析
目标=SDS-PAGE · Western blot · 酶活测定
表达产物的检测分析
19
包涵体的形成与复性
目标=细菌表达中包涵体的成因 · 溶解 · 复性策略及与酵母可溶性表达的对比
包涵体的形成复性
20
酵母分泌表达与信号肽
目标=α-factor · SUC2等信号肽的设计 · 分泌效率优化及培养基上清收获
酵母分泌表达信号肽
21
多基因共表达与途径组装
目标=细菌双顺反子 · 多顺反子载体与酵母多基因整合策略在代…
多基因共表达途径组装
22
载体稳定性与拷贝数控制
目标=细菌质粒的分配稳定性 · 酵母整合型与附加型载体的拷贝数调控
载体稳定性拷贝数控制
23
高通量载体构建与自动化
目标=96孔板克隆 · 液体处理机器人 · 自动化筛选在载体构建中的应用
高通量载体构建自动化
24
CRISPR与基因组编辑在载体构建中的辅助作用
目标=细菌与酵母中基因敲除 · 敲入对表达载体功能验证的支持
CRISPR基因组编辑
25
表达载体在蛋白生产中的应用案例
目标=细菌生产重组胰岛素 · 酵母生产乙肝表面抗原等实例分析
表达载体蛋白生产
26
表达载体在代谢工程中的应用案例
目标=细菌生产青蒿素前体 · 酵母生产紫杉醇前体等途径构建
表达载体代谢工程
27
表达载体在合成生物学中的应用
目标=标准化元件 · 底盘细胞改造 · 基因线路构建中的载体设计
表达载体合成生物学
28
载体构建的合规性与生物安全
目标=抗生素抗性基因的生物安全考虑 · 酵母与细菌表达系统的法规要求
载体构建的合规性生物安全
29
载体构建实验记录与数据管理
目标=实验设计 · 原始数据记录 · 电子实验记录本的使用与可重复性
载体构建实验记录数据管理
30
课程总结与项目实战
目标=综合运用所学 · 独立完成一个酵母或细菌表达载体的设计 · 构建与初步表达验证
课程总结项目实战