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001-分子克隆与基因工程
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《哺乳动物细胞表达载体工程》
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哺乳动物细胞表达载体工程
共计 30 章节
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01
课程导入与载体工程全景
目标=哺乳动物细胞表达载体的定义 · 分类 · 发展历程
课程导入
载体工程全景
02
哺乳动物细胞表达系统选择
目标=CHO · HEK293 · NS0
哺乳动物细胞表达…
CHO
03
表达载体核心元件解析
目标=启动子 · 增强子 · 内含子
表达载体核心元件…
目标=启动子
04
启动子工程与转录调控
目标=CMV · EF1α · CAG
启动子工程
转录调控
05
筛选标记与基因扩增系统
目标=neo · hygro · puro
筛选标记
基因扩增系统
06
载体复制与附加体维持
目标=oriP/EBNA1 · SV40 ori等附加体载体与整合型…
载体复制
附加体维持
07
分泌信号与蛋白定位元件
目标=信号肽 · KDEL · 前导序列
分泌信号
蛋白定位元件
08
多基因共表达载体设计
目标=IRES · 2A肽 · 双启动子
多基因共表达载体…
IRES
09
稳定细胞池与克隆筛选载体
目标=整合位点 · MAR/SAR · 绝缘子元件与高产稳定克隆构建实战
稳定细胞池
克隆筛选载体
10
瞬时表达载体优化
目标=PEI转染 · 磷酸钙转染 · 增强子组合与瞬时表达产量提升任务
瞬时表达载体优化
PEI
11
载体骨架与克隆策略
目标=酶切连接 · Gibson · Golden Gate
载体骨架
克隆策略
12
定点整合与基因组编辑载体
目标=CRISPR/Cas9 · TALEN · AAVS1
定点整合
基因组编辑载体
13
病毒载体衍生表达系统
目标=慢病毒 · 腺相关病毒 · 逆转录病毒载体在哺乳动物细胞表达中的…
病毒载体衍生表达…
目标=慢病毒
14
诱导型表达载体工程
目标=Tet-On/Tet-Off · 蜕皮激素 · cumate等诱导系统载体构建与剂量…
诱导型表达载体工…
Tet-On/Tet-O…
15
表达载体密码子优化与mRNA稳定性
目标=密码子偏好 · GC含量 · 5'UTR
mRNA
表达载体密码子优…
16
抗体与融合蛋白表达载体
目标=单抗 · 双抗 · Fab
抗体
融合蛋白表达载体
17
难表达蛋白的载体策略
目标=膜蛋白 · 毒性蛋白 · 聚集倾向蛋白的标签
难表达蛋白的载体…
目标=膜蛋白
18
载体转染与递送方法匹配
目标=脂质体 · 电转 · 病毒转导与载体元件
载体转染
递送方法匹配
19
表达载体拷贝数与染色质环境
目标=整合拷贝 · 位点效应 · 表观调控与载体持续表达工程
表达载体拷贝数
染色质环境
20
载体稳定性与基因组安全性
目标=重复序列 · 重组风险 · 沉默化
载体稳定性
基因组安全性
21
高通量载体构建与文库筛选
目标=条形码 · 池化筛选 · 报告基因与自动化载体变体测试任务
高通量载体构建
文库筛选
22
表达载体工艺放大关联
目标=种子库 · 转染规模 · 载体质量
表达载体工艺放大…
目标=种子库
23
载体分析鉴定与质量控制
目标=测序 · 酶切 · qPCR
载体分析鉴定
质量控制
24
表达量检测与载体性能评价
目标=ELISA · Western · 流式
表达量检测
载体性能评价
25
载体工程中的AI与计算设计
目标=序列优化 · 元件预测 · 机器学习辅助启动子与UTR设计
AI
载体工程
26
工业级表达载体案例
目标=CHO稳定池 · 灌流培养 · 高产克隆与载体元件迭代真实项目复盘
工业级表达载体案…
CHO
27
治疗性蛋白与基因治疗载体案例
目标=重组蛋白药物 · 细胞治疗 · 基因治疗载体的合规与设计差异
治疗性蛋白
基因治疗载体案例
28
载体知识产权与法规考量
目标=元件专利 · 宿主细胞许可 · IND申报中载体相关CMC要点
载体知识产权
法规考量
29
载体故障排查与优化实战
目标=低表达 · 不稳定 · 沉默
载体故障排查
优化实战
30
课程综合项目
目标=从靶蛋白到表达载体全流程设计 · 构建 · 验证与数据汇报
课程综合项目
目标=从靶蛋白到…
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