3. 标准品与校准品的准备

标准曲线能否真实反映待测物的响应规律，首先取决于“标尺”本身是否可靠。标准品与校准品就是这把标尺：标准品通常是已知纯度、已知含量的高纯物质，用于配制校准曲线和赋值；校准品则是已经赋值的成品，可直接用于仪器校准或方法验证。两者在来源、纯度、称量方式、储存要求上都有明确差异，本节围绕“选、称、溶、稀、存、管”六个环节展开，重点讲清楚实际怎么做、做到什么程度算合格。

一、标准品的选择与纯度要求

选择标准品时，优先考虑有证标准物质（CRM），其证书应给出特性值、不确定度、有效期和储存条件。若没有 CRM，可选择色谱纯或分析纯的高纯试剂，但必须自行标定纯度，并在记录中注明来源、批号和纯度依据。纯度要求与检测方法直接相关：用于色谱外标法的标准品，主成分纯度一般应不低于 98%，用于痕量分析或杂质谱研究时应不低于 99%；用于分光光度法、滴定法等常量分析时，纯度不低于 99.5% 更为稳妥。纯度不足会直接引入系统偏差，例如主成分纯度为 97% 的标准品，若按 100% 称量配制，整条标准曲线会整体偏低约 3%。

此外要关注标准品的“适用形态”：易吸潮的固体应选密封安瓿瓶包装；易挥发的液体标准品应选带隔垫的密封瓶；对光敏感的物质应选棕色瓶包装。标准品与校准品的区别还体现在赋值上：校准品附带赋值证书和不确定度，可直接使用；标准品需要自行称量、溶解、稀释，操作环节多，误差来源也更多，因此对操作规范的要求更高。

二、称量与溶解规范

称量前应确认天平处于校准有效期内，感量满足要求：称取 10 mg 以上样品可用万分之一天平，称取 10 mg 以下或微量标准品应使用十万分之一天平。称量时使用干燥洁净的称量瓶或减量法称量，避免样品吸潮和静电干扰。实际操作中，先称空容器质量，加入样品后再称总质量，两次差值即为样品质量，可减少转移损失。称量记录应保留到 0.01 mg 位。

溶解环节的关键是“完全溶解、定容准确、溶剂匹配”。先用少量适宜溶剂将标准品完全溶解，再转移至容量瓶定容，避免直接向容量瓶中加固体导致溶解不完全。溶剂应与流动相或样品基质兼容，例如反相色谱常用甲醇或乙腈溶解，水溶性标准品可用纯水或缓冲液。溶解后应观察是否有不溶物、浑浊或析出，必要时超声助溶，但超声时间不宜过长以免升温导致降解。定容后应充分摇匀，并标注配制日期、浓度、溶剂和配制人。

三、稀释规范与浓度梯度设计

稀释应遵循“逐级稀释、体积比准确、器具专用”的原则。高浓度储备液向低浓度稀释时，每一级稀释倍数不宜超过 100 倍，否则移液误差会被放大。例如从 1 mg/mL 储备液配制 10 μg/mL 工作液，可先取 100 μL 稀释至 10 mL 得到 10 μg/mL，再逐级向下稀释。移液器应定期校准，吸头应匹配且不混用；容量瓶和移液管应按需选用 A 级。稀释用水或溶剂应现用现配，避免溶剂挥发改变浓度。

浓度梯度设计应覆盖待测样品的预期浓度范围，一般设置 5～7 个浓度点，最低点接近方法定量限，最高点不低于样品预期浓度的 120%。以下为示例参数（合理假设，非实测数据）：储备液 1.00 mg/mL，工作液 100 μg/mL，标准曲线点设为 0.5、1、2、5、10、20 μg/mL，每个点独立配制并平行两份。稀释过程应记录每一级的移取体积、定容体积和理论浓度，便于复核。

四、储存条件与有效期管理

储存条件必须按证书或说明书执行，不能凭经验“统一放冰箱”。固体标准品一般密封、避光、干燥保存，多数在 −20℃ 或 2～8℃ 条件下稳定；易吸潮物质应放置干燥器中并避免频繁开盖。液体标准品和有机溶剂配制的储备液应注意防挥发，瓶口用封口膜密封。储备液建议分装成小体积冻存，避免反复冻融导致浓度变化；工作液一般现配现用，不宜长期存放。

有效期管理要区分“证书有效期”和“开封后使用期”。证书有效期指未开封状态下的稳定期限，开封后受吸潮、氧化、污染影响，实际可用期往往更短。建议建立台账，记录名称、批号、纯度、称量质量、配制浓度、溶剂、配制日期、有效期、配制人和复核人。储备液有效期可参考示例设定为 1 个月，工作液为 1 周，到期即重新配制，不得“看着没坏就继续用”。若发现浑浊、沉淀、颜色变化，或标准曲线斜率、截距与历史数据明显偏离，应停用并追溯原因。

综上，标准品与校准品的准备是一条从选择、称量、溶解、稀释到储存、有效期管理的完整链条，任一环节失控都会传导到标准曲线和回收率结果上。把每一步的记录做扎实、把有效期管到位，后续的曲线拟合与质量评价才有可靠基础。