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生物技术_生物工程与智能实验室
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010-蛋白纯化与结构功能表征
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《蛋白结构稳定性表征工程》
VIP14
本课程属于:010-蛋白纯化与结构功能表征
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蛋白结构稳定性表征工程
共计 30 章节
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01
蛋白结构稳定性表征工程导论
目标=课程目标 · 稳定性定义与热力学基础 · 表征工程在生物药与酶工程中的定位
蛋白结构稳定性表…
目标=课程目标
02
蛋白稳定性核心热力学参数
目标=折叠自由能ΔG · 熔解温度Tm · 聚集起始温度Tagg
蛋白稳定性核心热…
目标=折叠自由能…
03
样品与缓冲体系工程
目标=缓冲液选择 · pH与离子强度优化 · 辅料稳定效应
样品
缓冲体系工程
04
圆二色光谱表征二级结构稳定性
目标=远紫外CD谱解析 · 热变性曲线拟合 · Tm提取
圆二色光谱表征二…
CD
05
内源荧光表征三级结构稳定性
目标=色氨酸/酪氨酸环境探针 · 发射峰位移 · 化学变性曲线
内源荧光表征三级…
目标=色氨酸
06
差示扫描量热法测定热稳定性
目标=DSC热谱解析 · Tm与ΔHcal提取 · 多结构域去卷积
差示扫描量热法测…
DSC
07
荧光染料法表征聚集与构象稳定性
目标=ANS · Sypro Orange · ThT等探针选择
荧光染料法表征聚…
构象稳定性
08
静态与动态光散射表征粒径与聚集
目标=DLS · SLS · Zeta电位
静态
动态光散射表征粒…
09
分析超速离心表征寡聚状态与稳定性
目标=沉降速度 · 沉降平衡 · 分子量分布
分析超速离心表征…
稳定性
10
尺寸排阻色谱表征聚集与降解
目标=SEC-HPLC/UPLC方法 · 单体/聚体/片段定量 · 流动相条件对稳定性的影响
尺寸排阻色谱表征…
降解
11
毛细管电泳与等电聚焦表征电荷异质性
目标=cIEF · icIEF · CZE
毛细管电泳
等电聚焦表征电荷…
12
傅里叶变换红外光谱表征二级结构
目标=酰胺I带解析 · 二级结构定量 · 热诱导构象变化
傅里叶变换红外光…
目标=酰胺I带解…
13
拉曼光谱与紫外共振拉曼表征结构稳定性
目标=酰胺I/III带 · 侧链环境 · 原位热变性监测
拉曼光谱
紫外共振拉曼表征…
14
核磁共振表征蛋白稳定性与动态
目标=HSQC指纹 · 化学位移扰动 · 氢氘交换
核磁共振表征蛋白…
动态
15
氢氘交换质谱表征构象动态与稳定性
目标=HDX-MS实验设计 · 交换速率解析 · 局部去折叠
氢氘交换质谱表征…
稳定性
16
有限蛋白酶解表征构象柔性与稳定性
目标=酶解条件优化 · 切割位点分析 · 构象变化区域识别
有限蛋白酶解表征…
稳定性
17
化学变性剂滴定表征稳定性
目标=GdmCl/尿素滴定 · 荧光/CD/SEC检测 · 两态/三态模型拟合
化学变性剂滴定表…
GdmCl
18
热挑战与加速稳定性实验设计
目标=温度梯度 · 时间序列 · Arrhenius分析
热挑战
加速稳定性实验设…
19
pH与离子强度稳定性图谱
目标=pH-稳定性指纹 · 缓冲液种类效应 · 离子特异性
pH
离子强度稳定性图…
20
冻融与冻干稳定性表征
目标=冻融循环 · 冷冻浓缩效应 · 冻干工艺参数
冻融
冻干稳定性表征
21
高浓度蛋白制剂的稳定性表征
目标=粘度 · 自相互作用 · 相分离
高浓度蛋白制剂的…
目标=粘度
22
突变体稳定性工程与表征
目标=理性设计 · 定向进化 · 稳定性-活性权衡
突变体稳定性工程
表征
23
配体与辅料对蛋白稳定性的影响
目标=结合亲和力 · 热位移 · 构象锁定
配体
辅料对蛋白稳定性…
24
蛋白-蛋白相互作用与稳定性
目标=界面分析 · 寡聚平衡 · 聚集路径
蛋白
蛋白相互作用
25
稳定性数据整合与多变量分析
目标=多方法数据融合 · 主成分分析 · 聚类
稳定性数据整合
多变量分析
26
稳定性表征方法验证与质量控制
目标=精密度 · 准确度 · 线性
稳定性表征方法验…
质量控制
27
高通量稳定性筛选平台
目标=微孔板DSC · 荧光热位移 · 静态光散射
高通量稳定性筛选…
DSC
28
强制降解与稳定性指示方法
目标=热 · pH · 氧化
强制降解
稳定性指示方法
29
蛋白稳定性表征在生物药开发中的应用
目标=候选分子筛选 · 配方开发 · 工艺变更可比性
蛋白稳定性表征
生物药开发
30
蛋白结构稳定性表征工程实战项目
目标=从样品到报告的全流程设计 · 方法选择 · 数据解析
蛋白结构稳定性表…
目标=从样品到报…
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