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蛋白功能活性评价工程

共计 30 章节
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01
蛋白功能活性评价工程导论
目标=课程定位 · 核心概念 · 评价工程的整体流程与关键决策点
蛋白功能活性评价…目标=课程定位
02
目标蛋白与活性定义
目标=如何根据应用场景明确目标蛋白 · 功能活性指标及可接受的评价标准
目标蛋白活性定义
03
样品制备与活性保持
目标=从表达体系 · 纯化策略到缓冲液配方 · 确保待测蛋白处于可评价的活性状态
样品制备活性保持
04
蛋白浓度与纯度测定
目标=BCA · Bradford · A280
蛋白浓度纯度测定
05
酶活性评价基础
目标=酶活单位定义 · 初速度测定 · 底物饱和曲线与线性范围确定
酶活性评价基础目标=酶活单位定…
06
酶动力学参数测定
目标=Km · Vmax · kcat
酶动力学参数测定Km
07
抑制剂与激活剂评价
目标=IC50 · Ki · EC50的测定方案
抑制剂激活剂评价
08
结合活性评价
目标=平衡解离常数KD的测定策略 · 包括ITC · SPR
结合活性评价KD
09
受体-配体相互作用评价
目标=细胞表面受体结合实验 · 竞争结合实验及亲和力与功能活性的关联…
受体配体相互作用评价
10
蛋白-蛋白相互作用功能评价
目标=共免疫沉淀 · Pull-down · 交联质谱与功能互补实验的设计与解读
蛋白蛋白相互作用功能…
11
细胞水平功能活性评价
目标=报告基因 · 细胞增殖 · 凋亡
细胞水平功能活性…目标=报告基因
12
信号通路激活评价
目标=磷酸化蛋白检测 · 通路抑制剂验证及蛋白活性对下游信号的…
信号通路激活评价目标=磷酸化蛋白…
13
免疫学功能评价
目标=抗体亲和力 · 中和活性 · ADCC/CDC效应及免疫细胞激活实…
免疫学功能评价目标=抗体亲
14
蛋白稳定性与活性半衰期评价
目标=热稳定性 · 化学稳定性 · 血清稳定性及活性衰减动力学分析
蛋白稳定性活性半衰期评价
15
翻译后修饰对活性的影响评价
目标=磷酸化 · 糖基化 · 泛素化等修饰的检测及其功能后果评估
翻译后修饰对活性…目标=磷酸化
16
突变体功能活性评价
目标=定点突变 · 截短体 · 融合蛋白的活性比较与结构-功能关系初…
突变体功能活性评…目标=定点突变
17
蛋白药物候选分子的活性评价
目标=从早期筛选到候选分子确定的活性…
蛋白药物候选分子…目标=从早期筛选…
18
高通量活性筛选方法
目标=384/1536孔板 · 微流控 · 液滴微流控及自动化工作站的应用与数据…
高通量活性筛选方…目标=384
19
蛋白活性评价中的对照设计
目标=阳性对照 · 阴性对照 · 空白对照
蛋白活性评价对照设计
20
实验数据质控与统计分析
目标=Z因子 · CV · 重复性
实验数据质控统计分析
21
活性评价方法的验证
目标=准确度 · 精密度 · 线性
活性评价方法的验…目标=准确度
22
蛋白活性评价中的干扰因素
目标=缓冲液成分 · 聚集 · 内毒素
蛋白活性评价干扰因素
23
酶联免疫吸附与类似方法评价蛋白活性
目标=ELISA · DELFIA · AlphaLISA在活性定量中的合理…
酶联免疫吸附类似方法评价蛋白…
24
生物物理方法在活性评价中的辅助作用
目标=CD · DSC · DSF
生物物理方法活性评价
25
蛋白活性评价的标准化与参考品
目标=标准品制备 · 定值 · 稳定性监测及实验室间比对
蛋白活性评价的标…参考品
26
工业酶活性评价工程
目标=底物特异性 · 操作稳定性 · pH/温度曲线及在真实工艺条件下的活…
工业酶活性评价工…目标=底物特异性
27
治疗性蛋白活性评价案例
目标=从细胞学活性到动物模型药效的桥…
治疗性蛋白活性评…目标=从细胞学活…
28
蛋白活性评价中的法规与伦理
目标=GLP · GMP · ICH指南及生物类似药活性评价的特殊…
蛋白活性评价法规
29
活性评价报告撰写与数据呈现
目标=图表规范 · 结论推导 · 局限性说明及向决策者传达关键信息
活性评价报告撰写数据呈现
30
蛋白功能活性评价工程综合实战
目标=针对一个真实蛋白对象 · 设计完整评价方案 · 执行关键实验并撰写评价报告
蛋白功能活性评价…目标=针对一个真…