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膜蛋白纯化与稳定性评价

共计 30 章节
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01
膜蛋白纯化与稳定性评价导论
目标=课程目标 · 膜蛋白的生物学意义 · 纯化与稳定性评价的总体流程与关键挑战
膜蛋白纯化稳定性评价导论
02
膜蛋白的分类与结构特征
目标=整合膜蛋白 · 外周膜蛋白 · 脂锚定蛋白的结构差异
膜蛋白的分类结构特征
03
膜蛋白表达系统选择
目标=大肠杆菌 · 酵母 · 昆虫细胞
膜蛋白表达系统选…目标=大肠杆菌
04
膜蛋白增溶策略
目标=去垢剂类型与选择依据 · 增溶原理 · 临界胶束浓度
膜蛋白增溶策略目标=去垢剂类型
05
去垢剂在膜蛋白纯化中的应用
目标=常用去垢剂（DDM · LMNG · OG
去垢剂膜蛋白纯化
06
膜蛋白纯化中的标签与亲和层析
目标=His标签 · GST标签 · FLAG标签
膜蛋白纯化标签
07
膜蛋白的离子交换与凝胶过滤层析
目标=缓冲液条件优化 · 去垢剂兼容性 · 聚集体与单体分离
膜蛋白的离子交换凝胶过滤层析
08
膜蛋白的亲和纯化进阶
目标=基于配体 · 抗体 · 纳米抗体的亲和纯化
膜蛋白的亲纯化进阶
09
膜蛋白纯化中的稳定性维持
目标=缓冲液添加剂（甘油 · 盐 · 还原剂等）的作用
膜蛋白纯化稳定性维持
10
膜蛋白稳定性评价的常规方法
目标=圆二色谱 · 荧光光谱 · 动态光散射
膜蛋白稳定性评价…目标=圆二色谱
11
膜蛋白热稳定性分析
目标=热变性曲线测定 · Tm值计算 · 热 shift 实验在配体结合研究中…
膜蛋白热稳定性分…目标=热变性曲线…
12
膜蛋白化学稳定性与储存稳定性
目标=氧化 · 脱酰胺 · 水解等化学降解途径
膜蛋白化学稳定性储存稳定性
13
膜蛋白复性策略
目标=包涵体复性 · 稀释复性 · 透析复性
膜蛋白复性策略目标=包涵体复性
14
膜蛋白重构与脂质体组装
目标=重构方法（透析 · 稀释 · 凝胶过滤）
膜蛋白重构脂质体组装
15
膜蛋白纳米盘技术
目标=纳米盘组装原理 · MSP蛋白与脂质比例优化 · 纳米盘在稳定性评价中的应用
膜蛋白纳米盘技术目标=纳米盘组装…
16
膜蛋白稳定突变体与定向进化
目标=提高稳定性的突变策略 · 理性设计与定向进化 · 筛选方法
膜蛋白稳定突变体定向进化
17
膜蛋白纯化与稳定性评价中的分析技术整合
目标=SEC-MALS · 分析超速离心 · 质谱
膜蛋白纯化稳定性评价
18
G蛋白偶联受体的纯化与稳定性评价
目标=GPCR表达 · 增溶 · 纯化
G蛋白偶联受体的…稳定性评价
19
离子通道与转运蛋白的纯化与稳定性评价
目标=代表性蛋白的纯化流程 · 去垢剂选择 · 功能活性测定与稳定性评估
离子通道转运蛋白的纯化
20
膜蛋白复合物的纯化与稳定性评价
目标=复合物共纯化策略 · 交联与稳定化 · 化学计量比与完整性分析
膜蛋白复合物的纯…稳定性评价
21
膜蛋白纯化中的高通量筛选与自动化
目标=去垢剂与缓冲液条件的高通量筛选 · 自动化纯化平台 · 稳定性评价的微型化
膜蛋白纯化高通量筛选
22
膜蛋白稳定性评价的数据分析与统计
目标=曲线拟合 · Tm与ΔTm计算 · 统计学显著性
膜蛋白稳定性评价…统计
23
膜蛋白纯化与稳定性评价的常见问题与故障排除
目标=低表达 · 聚集 · 失活
膜蛋白纯化稳定性评价的常见…
24
膜蛋白纯化与稳定性评价的质量控制
目标=纯度 · 均一性 · 活性
膜蛋白纯化稳定性评价的质量…
25
膜蛋白纯化与稳定性评价在结构生物学中的应用
目标=为X射线晶体学 · 冷冻电镜 · NMR准备样品的关键考量
膜蛋白纯化稳定性评价
26
膜蛋白纯化与稳定性评价在药物发现中的应用
目标=靶向膜蛋白的小分子筛选 · 稳定性评价作为结合验证工具
膜蛋白纯化稳定性评价
27
膜蛋白纯化与稳定性评价的案例研究一
目标=某GPCR的纯化与热稳定性优化…
膜蛋白纯化稳定性评价的案例…
28
膜蛋白纯化与稳定性评价的案例研究二
目标=某转运蛋白的增溶 · 纯化与功能重构评价
膜蛋白纯化稳定性评价的案例…
29
膜蛋白纯化与稳定性评价的前沿进展
目标=新型去垢剂 · 聚合物 · 纳米盘
膜蛋白纯化稳定性评价的前沿…
30
课程总结与实战项目设计
目标=整合所学知识 · 设计一个膜蛋白纯化与稳定性评价的完整… · 并进行汇报与讨论
课程总结实战项目设计