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多能干细胞培养与质量控制

共计 30 章节
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01
课程导入与多能干细胞全景
目标=明确多能干细胞定义 · 类型 · 来源与培养质控的总体目标
课程导入多能干细胞全景
02
多能干细胞的生物学基础
目标=掌握自我更新 · 多向分化 · 克隆形成
多能干细胞的生物…目标=掌握自我更…
03
实验室与设备配置
目标=围绕多能干细胞培养需求 · 规划洁净区 · 生物安全柜
实验室设备配置
04
培养基与关键试剂选择
目标=比较不同基础培养基 · 血清替代物 · 生长因子
培养基关键试剂选择
05
饲养层依赖培养体系
目标=以小鼠胚胎成纤维细胞饲养层为例 · 完成饲养层制备 · 丝裂霉素C处理
饲养层依赖培养体…目标=以小鼠胚胎…
06
无饲养层培养体系
目标=围绕基质胶包被 · 层粘连蛋白 · 玻连蛋白等条件
无饲养层培养体系目标=围绕基质胶…
07
三维与悬浮培养体系
目标=针对微载体 · 悬浮聚集 · 类器官样培养等方案
三维悬浮培养体系
08
细胞复苏与接种操作
目标=制定快速复苏 · 离心去毒 · 活率评估
细胞复苏接种操作
09
日常换液与传代操作
目标=建立换液频率 · 传代时机 · 消化方式
日常换液传代操作
10
克隆挑选与亚克隆建立
目标=从原代克隆形态 · 边界 · 致密度出发
克隆挑选亚克隆建立
11
细胞形态学观察与评分
目标=建立多能干细胞典型形态 · 自发分化 · 克隆边缘
细胞形态学观察评分
12
活率与增殖能力检测
目标=使用台盼蓝 · 自动计数 · CCK-8
活率增殖能力检测
13
多能性标志物检测
目标=通过TRA-1-60 · SSEA-4 · OCT4
多能性标志物检测TRA-1-60
14
自发分化监测与排除
目标=识别培养过程中出现的滋养层 · 内胚层 · 中胚层
自发分化监测排除
15
核型分析与基因组稳定性
目标=围绕G带核型 · 染色体计数 · 长期传代监测
核型分析基因组稳定性
16
拷贝数变异与基因组完整性
目标=使用SNP阵列 · 低深度全基因组测序等方法检测拷贝数变… · 判断培养适应性与致瘤风险
拷贝数变异基因组完整性
17
基因编辑后的多能干细胞质控
目标=针对CRISPR/Cas9等编… · 设计编辑效率 · 脱靶
基因编辑后的多能…CRISPR/Cas9
18
无菌操作与微生物污染控制
目标=建立细菌 · 真菌 · 支原体污染的预防
无菌操作微生物污染控制
19
病毒污染与内源因子检测
目标=针对EBV · CMV · HIV及内源逆转录病毒等风险
病毒污染内源因子检测
20
免疫原性与同种异体风险
目标=分析HLA表达 · 免疫原性检测 · 免疫抑制策略及多能干细胞衍生细胞的免…
免疫原性同种异体风险
21
致瘤性与残留未分化细胞控制
目标=围绕畸胎瘤形成 · 残留多能干细胞 · 致瘤性动物实验与替代检测
致瘤性残留未分化细胞控…
22
细胞库建立与层级管理
目标=完成主细胞库 · 工作细胞库的建库 · 检定
细胞库建立层级管理
23
冷冻保存与复苏稳定性
目标=比较程序降温 · 玻璃化 · 无血清冻存液等方案
冷冻保存复苏稳定性
24
培养过程记录与电子化追溯
目标=设计批记录 · 电子实验记录本 · 样本编码
培养过程记录电子化追溯
25
关键质量属性与放行标准
目标=从身份 · 纯度 · 效力
关键质量属性放行标准
26
稳定性研究与有效期设定
目标=设计长期传代 · 连续培养 · 冻存复苏后的稳定性研究
稳定性研究有效期设定
27
自动化与封闭式培养系统
目标=评估自动化液体处理 · 生物反应器 · 封闭式扩增平台在多能干细胞培养中的适…
自动化封闭式培养系统
28
放大培养与工艺转移
目标=从实验室规模向中试或临床规模放… · 分析接种密度 · 剪切力
放大培养工艺转移
29
偏差、变更与纠正预防措施
目标=围绕培养失败 · 质控超标 · 试剂变更
偏差变更
30
综合实战与课程总结
目标=以多能干细胞从复苏到放行的完整… · 整合培养操作 · 质控检测
综合实战课程总结