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稳定细胞系单克隆筛选与表型验证

共计 30 章节
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01
课程导入与全景认知
目标=稳定细胞系单克隆筛选与表型验证… · 在生物制药与功能研究中的位置 · 完整工作流概览
课程导入全景认知
02
稳定细胞系构建策略选择
目标=随机整合 · 定点整合 · 转座子系统
稳定细胞系构建策…目标=随机整合
03
表达载体设计与元件优化
目标=启动子 · 增强子 · 筛选标记
表达载体设计元件优化
04
宿主细胞选择与背景考量
目标=CHO · HEK293 · NS0
宿主细胞选择背景考量
05
转染与整合效率提升
目标=脂质体 · 电转 · 核转
转染整合效率提升
06
稳定池加压筛选与药物浓度爬坡
目标=嘌呤霉素 · 杀稻瘟菌素 · 新霉素
稳定池加压筛选药物浓度爬坡
07
有限稀释法单克隆铺板
目标=细胞计数与活力评估 · 铺板密度计算 · 96孔板与384孔板操作
有限稀释法单克隆…目标=细胞计数
08
单克隆源性证明与成像记录
目标=孔内单细胞确认 · Day 0成像 · 克隆追踪
单克隆源性证明成像记录
09
克隆生长监测与早期淘汰
目标=克隆形成率评估 · 生长速度分级 · 形态学观察
克隆生长监测早期淘汰
10
克隆挑取与扩增操作
目标=手动挑取 · 克隆环 · 有限稀释转移
克隆挑取扩增操作
11
高通量表达筛选方法
目标=ELISA · HTRF · AlphaLISA
高通量表达筛选方…ELISA
12
功能活性初筛
目标=报告基因 assay · 受体结合 · 中和活性
功能活性初筛assay
13
克隆稳定性与传代稳定性评估
目标=连续传代表达量监测 · 拷贝数稳定性 · mRNA水平
克隆稳定性传代稳定性评估
14
单克隆筛选中的代谢与产品质量分析
目标=葡萄糖/乳酸/氨代谢 · 糖基化 · 电荷变异体
单克隆筛选代谢
15
候选克隆的复筛与排名
目标=多维度评分体系 · 表达量 · 活性
候选克隆的复筛排名
16
表型验证的实验设计原则
目标=假设驱动 · 对照设置 · 生物学重复与技术重复
表型验证的实验设…目标=假设驱动
17
基因型验证与分子特征确认
目标=整合位点分析 · 拷贝数测定 · 转录本测序
基因型验证分子特征确认
18
蛋白表达与分泌表型验证
目标=Western blot · 免疫荧光 · 流式细胞术
蛋白表达分泌表型验证
19
细胞功能表型验证
目标=增殖 · 凋亡 · 迁移
细胞功能表型验证目标=增殖
20
受体-配体相互作用与亲和力验证
目标=SPR · BLI · ITC
受体配体相互作用
21
稳定性与强制降解表型验证
目标=热稳定性 · pH稳定性 · 氧化应激
稳定性强制降解表型验证
22
免疫学表型验证
目标=MHC表达 · 免疫细胞活化 · 细胞因子释放
免疫学表型验证MHC
23
组学水平表型验证
目标=转录组 · 蛋白质组 · 代谢组
组学水平表型验证目标=转录组
24
成像与形态学表型验证
目标=高内涵成像 · 共聚焦 · 活细胞成像
成像形态学表型验证
25
表型验证中的数据管理与可重复性
目标=实验记录 · LIMS · 元数据标准
表型验证数据管理
26
候选克隆的放大培养与工艺衔接
目标=摇瓶 · ambr · 生物反应器
候选克隆的放大培…工艺衔接
27
单克隆筛选与表型验证的法规与质控要求
目标=ICH · FDA · EMA指南
单克隆筛选表型验证的法规
28
失败案例与问题排查
目标=表达沉默 · 克隆不稳定 · 筛选标记失效
失败案例问题排查
29
自动化与智能化筛选平台
目标=液体处理工作站 · 克隆挑选仪 · 高内涵成像
自动化智能化筛选平台
30
课程综合实战与项目复盘
目标=从载体构建到单克隆筛选到表型验… · 里程碑 · 交付物
课程综合实战项目复盘