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STED显微技术实战指南

共计 30 章节
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01
课程导入
STED显微技术的历史背景 · 突破衍射极限的原理 · 课程目标与学习路径
课程导入STED
02
光学基础回顾
荧光 · 激发与发射光谱 · 点扩散函数（PSF）
光学基础回顾荧光
03
STED原理精讲
受激发射损耗的物理机制 · STED光束的环形光斑 · 损耗光与激发光的时空重叠
STED原理精讲
04
STED系统组成
激光器 · 扫描单元 · 物镜
STED系统组成
05
STED光束整形
相位板（涡旋相位板）原理 · 环形光斑生成 · 偏振态（圆偏振）对分辨率的影响
STED光束整形
06
STED分辨率评估
测量有效PSF · 计算分辨率提升 · 使用荧光珠或细胞膜进行标定
STED分辨率评估
07
荧光探针选择
适合STED的荧光染料（如Alexa… · Atto系列） · 荧光蛋白（如mEos
荧光探针选择STED
08
样品制备基础
固定与活细胞样品制备 · 盖玻片处理 · 防淬灭剂（如Mowiol
样品制备基础固定
09
STED成像参数优化
激发光功率 · STED光功率 · 像素停留时间
STED成像参数优化
10
STED与共聚焦对比
成像模式切换 · 分辨率差异 · 光漂白与光毒性比较
STED共聚焦对比
11
STED成像流程实战
从开机 · 激光预热 · 光路校准
STED成像流程实战
12
STED图像采集技巧
多通道成像 · 时间序列成像 · Z轴层切
STED图像采集技巧
13
STED图像处理基础
去噪算法（如去卷积 · 维纳滤波） · 图像增强
STED图像处理基础
14
STED图像定量分析
荧光强度测量 · 共定位分析 · 粒子追踪
STED图像定量分析
15
STED常见伪影与故障排除
光斑不对称 · 漂移 · 闪烁
STED常见伪影
16
STED光漂白与光毒性控制
降低光损伤的策略 · 抗漂白荧光团选择 · 活细胞成像的优化方案
STED光漂白
17
STED与活细胞成像
活细胞STED的挑战 · 快速扫描模式 · 低光毒性染料
STED活细胞成像
18
STED与超分辨技术比较
STED · STORM/PALM · SIM
STED超分辨技术比较
19
STED扩展技术
MINFLUX · STED-FCS · STED-FLIM
STED扩展技术
20
STED在神经科学中的应用
突触蛋白定位 · 树突棘动态 · 神经递质受体纳米组织
STED神经科学
21
STED在细胞生物学中的应用
细胞骨架（微管 · 肌动蛋白） · 线粒体内嵴
STED细胞生物学
22
STED在病理学与医学研究中的应用
肿瘤微环境 · 病原体宿主互作 · 蛋白聚集物检测
STED病理学
23
STED数据管理与可重复性
数据格式（如OME-TIFF） · 元数据记录 · 分析流程标准化
STED数据管理
24
STED系统维护与校准
日常维护 · 激光功率校准 · 光路对准
STED系统维护
25
STED实验设计
对照设置 · 样本数量 · 统计方法
STED实验设计
26
STED图像分析软件实战
ImageJ/Fiji插件（如STE… · Huygens · Imaris
STED图像分析软件实战
27
STED实战案例解析
从样品制备到最终图像的完整案例（如微… · 突触蛋白）
STED实战案例解析
28
STED常见问题问答
分辨率不达标 · 信号弱 · 背景高
STED常见问题问答
29
STED进阶技巧
自适应光学 · 3D-STED · STED与单分子追踪结合
STED进阶技巧
30
综合实战项目
设计并完成一个STED成像实验 · 从选题 · 样品制备
综合实战项目STED