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FRET成像实战指南

共计 30 章节
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01
课程导入
FRET成像的定义 · 生物学意义 · 课程目标与学习路径
课程导入FRET
02
FRET基本原理
荧光共振能量转移的物理机制 · 关键参数（R0 · 距离依赖）与能量转移效率
FRET基本原理
03
荧光蛋白与染料选择
常用供体-受体对（CFP-YFP · GFP-mCherry等）的优缺点及…
荧光蛋白染料选择
04
显微镜系统配置
宽场 · 共聚焦 · 双光子等成像平台对FRET实验的适配…
显微镜系统配置宽场
05
滤光片与二向色镜
激发/发射滤光片组合设计 · 串扰控制与通道分离
滤光片二向色镜
06
样品制备
细胞培养 · 转染/感染 · 固定与活细胞成像的样品准备要点
样品制备细胞培养
07
FRET对照设计
阳性对照 · 阴性对照 · 单转染对照的必要性与构建方法
FRET对照设计
08
数据采集策略
成像参数（曝光 · 激光功率 · 增益）优化
数据采集策略成像参数
09
背景扣除与平场校正
图像预处理步骤 · 消除背景荧光和光照不均
背景扣除平场校正
10
串扰校正
供体/受体通道串扰的定量测量与校正方…
串扰校正供体
11
FRET计算方法
敏化发射FRET（SE-FRET）的…
FRET计算方法
12
FRET计算方法
受体光漂白（Acceptor Pho…
FRET计算方法
13
FRET计算方法
FLIM-FRET（荧光寿命成像）的…
FRET计算方法
14
FRET计算方法
光谱FRET（Spectral FR…
FRET计算方法
15
FRET效率定量
从原始图像到FRET效率图的像素级计…
FRET效率定量
16
数据分析软件
ImageJ/Fiji插件（如FRE… · 商业软件（如Huygens）的使用
数据分析软件ImageJ/Fiji
17
FRET数据统计与可视化
多组比较 · 误差分析 · 散点图与热图制作
FRET数据统计
18
活细胞FRET动态监测
时间序列FRET成像的注意事项与运动…
FRET活细胞
19
FRET生物传感器设计
基于FRET的分子探针（如激酶活性探…
FRET生物传感器设计
20
案例实战
蛋白质-蛋白质相互作用检测——以GF…
案例实战GF
21
案例实战
细胞内钙离子浓度FRET成像——使用…
案例实战FRET
22
案例实战
膜电位或小分子检测的FRET应用与操…
案例实战FRET
23
常见问题与故障排除
低信噪比 · 光漂白 · 串扰严重
常见问题故障排除
24
FRET成像的陷阱与误区
常见错误操作 · 错误解读及避免方法
FRET成像的陷阱
25
高级技巧
结合光遗传学 · 超分辨成像或单分子FRET的进阶应用
高级技巧结合光遗传学
26
FRET与其他分子互作技术的比较
与Co-IP · BiFC · PLA等的优劣与互补
FRET其他分子互作技术…
27
实验记录与可重复性
标准化操作流程（SOP） · 数据记录与结果报告规范
实验记录可重复性
28
文献解读
如何批判性阅读FRET成像相关 · 提取关键方法与数据
文献解读FRET
29
综合实战项目
从实验设计 · 数据采集 · 分析到图表制作的完整项目演练
综合实战项目从实验设计
30
课程总结与展望
FRET成像技术前沿趋势 · 常见资源与社区 · 后续学习建议
课程总结FRET